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磁珠法核酸提取過程中(zhōng)常見的誤區(qū)有(yǒu)哪些

發布時間：

2023-12-13 09:12

磁珠法核酸提取過程中(zhōng)常見的誤區(qū)有(yǒu)哪些

使用(yòng)生物(wù)磁珠法提取核酸，在國(guó)内還屬于較為(wèi)新(xīn)穎的核酸提取方式，相比于傳統的氯仿異戊醇抽提法和離心柱試劑盒法，這種方法還有(yǒu)很(hěn)多(duō)人不甚了解，在使用(yòng)磁珠法提純核酸的過程中(zhōng)，也存在着一些誤區(qū)。

誤區(qū)一：磁珠使用(yòng)越多(duō)，提取效果越好

提取效果不佳時，實驗人員會考慮增加磁珠的用(yòng)量，認為(wèi)磁珠多(duō)加一點，可(kě)以吸附更多(duō)的核酸，但這種想法是不可(kě)取的。

磁珠的主要特點是既可(kě)以分(fēn)散于液體(tǐ)中(zhōng)，也可(kě)以在外加磁場作(zuò)用(yòng)下使固液相分(fēn)離，任何試劑體(tǐ)系，磁珠和液體(tǐ)的比例都應該是有(yǒu)一定阈值的，超過一定的比例，過多(duō)的磁珠将因為(wèi)無法均勻分(fēn)散于液體(tǐ)中(zhōng)，而喪失其分(fēn)散的特性，也使得洗滌過程中(zhōng)無法充分(fēn)增加核酸磁珠和液體(tǐ)接觸的效率。而過量的磁珠也會吸附更多(duō)的雜質(zhì)，對于除雜的效果影響非常大。甚至有(yǒu)些時候，過多(duō)的磁珠會吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體(tǐ)體(tǐ)系中(zhōng)起主要作(zuò)用(yòng)的功能(néng)成分(fēn)，導緻整個試劑盒效率低下。有(yǒu)很(hěn)多(duō)時候，在提取效果不佳的時候，減少磁珠使用(yòng)量，反而是提升提取效果的好途徑。

誤區(qū)二：試劑使用(yòng)的越多(duō)，提取效果越好

裂解效果不好？增加裂解液使用(yòng)量。這是很(hěn)多(duō)客戶在使用(yòng)試劑盒中(zhōng)的慣性思維，但是對于磁珠法而言，每增加一部分(fēn)液體(tǐ)體(tǐ)積，減少了更多(duō)的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會導緻吸附率的大幅度下降。所以很(hěn)多(duō)時候，雖然增加裂解液和洗滌液确實能(néng)夠起到增強裂解和增強洗滌的作(zuò)用(yòng)，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，無法保證磁珠碰撞效率是不能(néng)保證核酸提取效率的，所以單純增加試劑使用(yòng)量改善提取效果并不一定完全有(yǒu)效。

誤區(qū)三：洗滌次數越多(duō)，提取效果越好

提取得到的核酸雜質(zhì)過多(duō)時，使用(yòng)者會考慮多(duō)進行幾次洗滌，以得到更為(wèi)純淨的核酸。增加洗滌次數确實有(yǒu)利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂的可(kě)能(néng)性，所以一般來說洗滌次數控制在2~4次為(wèi)宜。

誤區(qū)四：樣本取用(yòng)的越多(duō)，提取效果越好

在樣本不夠新(xīn)鮮或者核酸含量本身很(hěn)少的情況下，往往核酸提取效果不好，會采用(yòng)多(duō)取樣本的方式增加核酸提取量。但簡單地增加樣本取樣量，有(yǒu)時會引入過多(duō)的雜質(zhì)，超出裂解液裂解能(néng)力，也會使提取效率降低，所以并不推薦通過簡單的增加樣本取樣量的方式來達到增加提取量的目的。

如果确實是由于樣本量不足而引起的提取量過低，建議在前處理(lǐ)先經過富集或者濃縮步驟再開始提取；或者增加裂解的完全性，使更多(duō)的核酸暴露出來也是一種解決方法。

誤區(qū)五：某一種磁珠好，應該在所有(yǒu)實驗中(zhōng)效果都好

磁珠的種類是多(duō)種多(duō)樣的，粒徑大小(xiǎo)不同，分(fēn)散性不同，磁響應時間不同，包被基礎基質(zhì)不同，外層修飾官能(néng)團不同，包被密度不同，官能(néng)團臂長(cháng)不同，會導緻磁珠特性千差萬别，所以不同磁珠所适應的實驗和體(tǐ)系也是不同的。像同樣是核酸提取的試劑，配方也并不完全相同，同樣應用(yòng)于核酸提取的磁珠，性質(zhì)也并非完全一緻。

有(yǒu)的磁珠在常量核酸提取中(zhōng)表現出了更高的吸附效率，有(yǒu)的磁珠更适用(yòng)于微量核酸提取，有(yǒu)的磁珠适合偏酸性系列的試劑體(tǐ)系，有(yǒu)的磁珠适合偏堿性系列的試劑體(tǐ)系，有(yǒu)的磁珠磁響應性好但是沉降速度快，有(yǒu)的磁珠沉降速度慢但是磁響應時間長(cháng)。很(hěn)少有(yǒu)一種磁珠能(néng)适用(yòng)于所有(yǒu)實驗的情況，除了固定的試劑盒配合，多(duō)數情況下，磁珠和試劑體(tǐ)系都要做一定時間的配合調整。

誤區(qū)六：和某種試劑盒對比效果不好，是磁珠不好

很(hěn)多(duō)客戶在篩選磁珠過程中(zhōng)都是在已經成熟試劑體(tǐ)系下，簡單地等量替換磁珠，用(yòng)于比較磁珠效果。這樣會很(hěn)容易得出某種磁珠效果不好的結論，但實際上，由于不同磁珠适合的體(tǐ)系和用(yòng)量是不同的，往往需要調整過後才能(néng)獲得更好的提取效果。

上海領駿生物(wù)科(kē)技(jì )有(yǒu)限公(gōng)司成立于2016年，位于上海市青浦區(qū)張江雲立方園區(qū)。公(gōng)司長(cháng)期緻力于生物(wù)領域内相關産(chǎn)品的研發、生産(chǎn)和銷售，産(chǎn)品主要包括磁性納米材料和磁珠法核酸提取純化試劑。公(gōng)司一直堅持以“質(zhì)量、誠信、團結、奮進”為(wèi)宗旨，嚴格規範質(zhì)量管理(lǐ)體(tǐ)系，持續創新(xīn)、精(jīng)益求精(jīng)，為(wèi)客戶提供優質(zhì)的産(chǎn)品和服務(wù),被認定為(wèi)高新(xīn)技(jì )術企業和上海市專精(jīng)特新(xīn)企業。