News

新(xīn)聞資訊

全部分(fēn)類



公(gōng)司新(xīn)聞

行業新(xīn)聞

首頁(yè)

體(tǐ)外診斷中(zhōng)常見核酸提取純化方法有(yǒu)哪些

發布時間：

2024-04-11 14:57

體(tǐ)外診斷中(zhōng)常見核酸提取純化方法有(yǒu)哪些

體(tǐ)外診斷，是指在人體(tǐ)之外，通過對人體(tǐ)樣本(血液、體(tǐ)液、組織等)進行檢測而獲取臨床診斷信息，進而判斷疾病或機體(tǐ)功能(néng)的産(chǎn)品和服務(wù)。而檢測人體(tǐ)樣本的關鍵步驟之一，即是樣本中(zhōng)的核酸（DNA和RNA）純化。核酸純化的方法是影響所提取核酸質(zhì)量的重要因素，隻有(yǒu)高質(zhì)量的核酸才能(néng)滿足下遊的各種應用(yòng)。核酸是分(fēn)子生物(wù)學(xué)的基礎，而核酸提取是核酸檢測乃至于整個分(fēn)子行業繞不過去的門檻，很(hěn)多(duō)時候一份樣本的核酸提取的好壞直接決定了檢測結果的有(yǒu)效性。

為(wèi)什麽需要核酸提取？

核酸提取為(wèi)大量廣泛研究和應用(yòng)提供了答(dá)案，獲得的核酸可(kě)以多(duō)種方式進行應用(yòng)。準确的研究目的，決定了要提取的核酸類型；核酸的應用(yòng)往往影響提取方法的選擇。為(wèi)了确定好的研究方法，有(yǒu)必要清楚了解核酸的下遊應用(yòng)以及任何與樣品類型相關的潛在限制。雖然依據樣品類型，細胞裂解方式不同，但整體(tǐ)的核酸提取核心原則不變：細胞或組織樣品裂解，去除非核酸污染物(wù)。

核酸提取純化原則和要求

1、保證核酸一級結構的完整性；

2、排除其它分(fēn)子的污染（如提取DNA時排除RNA的幹擾）；

3、核酸樣品中(zhōng)不存在對酶有(yǒu)抑制作(zuò)用(yòng)的有(yǒu)機溶劑和過高濃度的金屬離子；

4、降低生物(wù)大分(fēn)子如蛋白質(zhì)、多(duō)糖和脂類分(fēn)子的污染。

常見核酸提取純化方法

1、苯酚氯仿抽提法

苯酚氯仿提取DNA是利用(yòng)酚是蛋白質(zhì)的變性劑，反複抽提，使蛋白質(zhì)變性，SDS(十二烷基磺酸鈉)将細胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白質(zhì)或多(duō)肽或小(xiǎo)肽分(fēn)子，變性降解蛋白，使DNA從細胞核中(zhōng)遊離出來，DNA易溶于水，不溶于有(yǒu)機溶劑。蛋白質(zhì)分(fēn)子表面帶有(yǒu)親水基團，也容易進行水合作(zuò)用(yòng)，并在表面形成一層水化層，使蛋白質(zhì)分(fēn)子能(néng)順利地進入到水溶液中(zhōng)形成穩定的膠體(tǐ)溶液。當有(yǒu)機溶液存在時，蛋白質(zhì)的這種膠體(tǐ)穩定性遭到破壞，變性沉澱。離心後有(yǒu)機溶劑在試管底層(有(yǒu)機相)，DNA存在于上層水相中(zhōng)，蛋白質(zhì)則沉澱于兩相之間。利用(yòng)萃取原理(lǐ)，根據蛋白核酸溶于不同的試劑層，将槍頭伸入不同液層内抽取所需的成分(fēn)，經多(duō)次洗滌後獲得純化核酸。

缺點是由于使用(yòng)了苯酚、氯仿等試劑，毒性較大，長(cháng)時間操作(zuò)對人員健康有(yǒu)較大影響，而且核酸的回收率較低，損失量較大，由于操作(zuò)體(tǐ)系大，不同實驗人員操作(zuò)重複性差，不利于保護RNA，很(hěn)難進行微量化的操作(zuò)。

2、離心柱法

此種方法是利用(yòng)核酸表面會覆蓋一層由水分(fēn)子構成的薄膜，在高鹽環境下，這層親水膜會遭到破壞從而核酸可(kě)被吸附在離心柱上，而其他(tā)雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、代謝(xiè)産(chǎn)物(wù)等則會被離心沉澱與核酸分(fēn)離。但即便如此，離心柱純化法仍存在缺點：

（1）高度依賴吸附膜的結合能(néng)力；

（2）洗脫不完全導緻核酸流失；

（3）無法大量提取核酸。

3、磁珠法核酸分(fēn)離技(jì )術

攜帶正電(diàn)荷的磁珠易于吸附負電(diàn)荷的核酸。一般而言，将樣品與結合緩沖液和磁珠混合，核酸與磁珠結合後，經過洗滌與磁場捕獲，洗脫下來的核酸可(kě)通過PCR等其它特定方法來檢測特定的DNA或RNA。磁分(fēn)離法廣泛應用(yòng)于診斷行業，且能(néng)實現高通量、自動化的核酸提取方法。

不同類型基因檢測均會涉及到核酸的提取和純化步驟。核酸提取純化的方法中(zhōng)，液體(tǐ)法和離心柱法均會涉及到有(yǒu)毒有(yǒu)機物(wù)的使用(yòng)，對環境和實驗操作(zuò)者均存在一定的危害。磁珠法核酸提取試劑盒，其中(zhōng)裂解液可(kě)以快速裂解樣品，使樣品的 DNA 遊離在溶液中(zhōng)，通過特異性吸附與磁珠結合，經過洗滌過程除去無機物(wù)、有(yǒu)機物(wù)等雜質(zhì)，使用(yòng)洗脫液将核酸從磁珠上洗脫下來，且不使用(yòng)苯酚、氯仿等有(yǒu)毒試劑；操作(zuò)簡單方便，全過程僅在一個離心管内完成，避免微量樣品的損失，且不容易交叉污染；兼容性廣，适用(yòng)于常見的分(fēn)子生物(wù)學(xué)樣品，包括細菌、昆蟲、各種動物(wù)組織、口腔細胞、毛發、組織中(zhōng)的細菌和病毒、植物(wù)組織等；從操作(zuò)方面來分(fēn)析，利用(yòng)磁珠固液相快速分(fēn)離的特性，實現簡便快速的操作(zuò)，也促進了自動化的進程和應用(yòng)的推廣。

我司具(jù)有(yǒu)多(duō)款磁珠法核酸提取試劑盒，例：核酸提取試劑（磁珠法）、DNA/RNA提取試劑（磁珠法）、DNA提取試劑（磁珠法）、總RNA提取試劑（磁珠法）等，各種試劑盒适用(yòng)于多(duō)種樣本，例如：動物(wù)組織、植物(wù)葉片、植物(wù)種子、細菌、血清、血漿、血塊、唾液、糞便等。

上海領駿生物(wù)科(kē)技(jì )有(yǒu)限公(gōng)司成立于2016年，位于上海市青浦區(qū)張江雲立方園區(qū)。公(gōng)司長(cháng)期緻力于生物(wù)領域内相關産(chǎn)品的研發、生産(chǎn)和銷售，産(chǎn)品主要包括磁性納米材料和磁珠法核酸提取純化試劑。公(gōng)司一直堅持以“質(zhì)量、誠信、團結、奮進”為(wèi)宗旨，嚴格規範質(zhì)量管理(lǐ)體(tǐ)系，持續創新(xīn)、精(jīng)益求精(jīng)，為(wèi)客戶提供優質(zhì)的産(chǎn)品和服務(wù)。